ביוטכנולוגיה/תספיג אימונולוגי (Immunoblotting)

ידועה גם בשם : הספג מערבי (Western Blot)

עקרונות השיטה

פרק זה לוקה בחסר. אתם מוזמנים לתרום לוויקיספר ולהשלים אותו. ראו פירוט בדף השיחה.

שלבי השיטה

השלבים :
שלב A : הרצת חלבון בג'ל.
שלב B : הספגה + שלבים נוספים
שלב C: קבלת תוצאות

מטרה : בדיקת נוכחת של חלבון לו קיים נוגדן.

השיטה :

1. בתוך תערובת מצויי אנטיגן (חלבון) אותו אנו רוצים למצוא.
2. הרצה בתוך חלבון ג'ל את מרכיבי התערובת.
3. הספגה = העברה לממבראנת (נייר) ניטרוצלולוז.
4. הוספת חלבון אינרטי (בדרך כלל חלב) לחסימת אתרים פנויים בממבראנה.
5. הוספת נוגדן ראשוני (1stAb) הנקשר לאנטיגן המבוקש.
6. הוספת נוגדן שניוני (2stAb) מסומן אנזימטית + סובסטרט (יוצר צבע), הנקשר אל הנוגדן הראשוני. בעקבות ההיקשרות נוצר תוצר בלתי מסיס. הנוגדנים השניונים מסומנים בר"א מבצעים אוטורדיוגרפיה.
7. פסי הצבע של התוצר מעיד על מיקום האנטיגן (במקרה שלנו ב-A ו-D).

יתרונות וחסרונות לעומת שיטת ELISA

פרק זה לוקה בחסר. אתם מוזמנים לתרום לוויקיספר ולהשלים אותו. ראו פירוט בדף השיחה.

שיטת האלייזה היא שיטה כמותית לעומת התספיג המערבי שהוא חצי כמותי, לא ניתן לדעת בוודאות כמה חלבונים מתקשרים לנוגדנים. בנוסף לכך שיטת האלייזה קצרה יותר מ תספיג המערבי ולוקחת פחות זמן