ביוטכנולוגיה/שיטת F.I.A – בוחן אימונופלואורסצנטי

מתוך ויקיספר, אוסף הספרים והמדריכים החופשי
קפיצה לניווט קפיצה לחיפוש

המטרה : זיהוי אנטיגנים מבוקשים ברקמה.

עקרונות השיטה[עריכה]

  • נוגדן מסומן - נוגדן אליו קשורים קבוצות כימיות פלואורצנטית. כאשר מאירים על קבוצות כימיות אלו קרן אור (באורך גל קצר יותר משלהם) הן פולטות אור.

שלבי השיטה[עריכה]

סימון ישיר של אנטיגן[עריכה]

סימון ישיר
  1. על רקמה יש אנטיגנים (משולשים ; או נוגדנים) אותם אנו רוצים למצוא. לכן, אנו מוסיפים נוגדן אימנופלורסנט. נוגדן האימנופלורסנט הם חומרים אשר בעקבות גירוי מאור, הם פולטים גל אור באורך ארוך יותר הנראה בעין.
  2. האנטיגנים נקשרים + שטיפה
  3. התבוננות במיקרוסקופ פלורסנטי (רואה רק אור פלורסנטי) ואיתור התמצאות האנטיגן.
  • מאירים באור אולטרה סגול וכך מתקבל משטח כהה ואליו מוארים המקומות אליהם נקשר האנטיגן/נוגדן המסומן.(סימון מוגבר)




שדרוג - סימון עקיף של אנטיגן[עריכה]

סימון עקיף
  1. על רקמה יש אנטיגנים אותם אנו רוצים לזהות + הוספת נוגדנים (ללא אימנופלורנסט), הם קושרים את 1stAb (נוגדן ראשוני).
  2. הוספת נוגדן שניוני (2ndAb) הנקשר אל FC + שטיפה.
  3. התבוננות במיקרוסקופ.

השדרוג מכפיל את הסימון הפלורסנטי משום שעל כל נוגדן ראשוני נקשרים 2 נוגדנים שניונים – כל אחד מהם מסומן פלורסנטית.




תחומי השימוש[עריכה]

  • איפיון רקמות סרטניות.
  • למחקרים בפיזיולוגיה של התא.

יתרונות וחסרונות[עריכה]

חסר