ביוטכנולוגיה/שיטת F.I.A – בוחן אימונופלואורסצנטי
המטרה : זיהוי אנטיגנים מבוקשים ברקמה.
עקרונות השיטה
[עריכה]- נוגדן מסומן - נוגדן אליו קשורים קבוצות כימיות פלואורצנטית. כאשר מאירים על קבוצות כימיות אלו קרן אור (באורך גל קצר יותר משלהם) הן פולטות אור.
שלבי השיטה
[עריכה]סימון ישיר של אנטיגן
[עריכה]
- על רקמה יש אנטיגנים (משולשים ; או נוגדנים) אותם אנו רוצים למצוא. לכן, אנו מוסיפים נוגדן אימנופלורסנט. נוגדן האימנופלורסנט הם חומרים אשר בעקבות גירוי מאור, הם פולטים גל אור באורך ארוך יותר הנראה בעין.
- הנוגדנים נקשרים + שטיפה
- התבוננות במיקרוסקופ פלורסנטי (רואה רק אור פלורסנטי) ואיתור התמצאות האנטיגן.
- מאירים באור אולטרה סגול וכך מתקבל משטח כהה ואליו מוארים המקומות אליהם נקשר האנטיגן/נוגדן המסומן.(סימון מוגבר)
שדרוג - סימון עקיף של אנטיגן
[עריכה]
- על רקמה יש אנטיגנים אותם אנו רוצים לזהות + הוספת נוגדנים (ללא אימנופלורנסט), הם קושרים את 1stAb (נוגדן ראשוני).
- הוספת נוגדן שניוני (2ndAb) הנקשר אל FC + שטיפה.
- התבוננות במיקרוסקופ.
השדרוג מכפיל את הסימון הפלורסנטי משום שעל כל נוגדן ראשוני נקשרים 2 נוגדנים שניונים – כל אחד מהם מסומן פלורסנטית.
תחומי השימוש
[עריכה]- איפיון רקמות סרטניות.
- למחקרים בפיזיולוגיה של התא.
יתרונות וחסרונות
[עריכה]חסר