ביוטכנולוגיה/מפת הגבלה

חשיבות מפת ההגבלה : באמצעות אנזימי הרסטרקיציה אנו יכולים לבנות עבור מקטע דנ"א, מפה. במפה ההגבלה יופיע גודל מקטע הדנ"א, אנזימי הרסטרקציה שחותכים אותו, וגודל המקטעים שנוצרים לאחר חיתוך. מפת ההגבלה מעניקה לנו תמונה כללית של הפלסמיד.

מספר ואורך מקטעי ההגבלה (יחידות מדידה) – נמדד ב – bp או Kbp.

כיצד יוצרים מפת הגבלה?

בניית מפת הגבלה על פי תוצאות אלקטרופורזה בג'ל (ברמה בסיסית)

• לוקחים מקטע דנ"א אותו רוצים לאפיין.
• חותכים באמצעות אנזימי רסטריקציה.
• מריצים המקטעים בג'ל אגרוז (אלקרופורזה).
• המקטעים רצים בג'ל – אין צורך בטיפול מקדים כיוון שדנ"א טעון שלילית (פוספט אי אורגני טעון שלילי), לכן המקטעים רצים על פי הבדלים בגודל, אל האלקטרודה החיובית.
• ניתן לצבוע את מקטעי הדנ"א באופן רדיואקטיבי או פלואורסצנטי:
  • פלואורסצנטי – צביעת הדנ"א באמצעות אתידיום ברומיד אשר זוהר בהארה UV.
  • רדיואקטיבי.
• קבלת תמונה.

דוגמא לבניית מפת הגבלה על פי תוצאות אלקטרופורזה בג'ל (ברמה בסיסית) - ראה תמונה.