ביוטכנולוגיה/תספיג אימונולוגי (Immunoblotting)

מתוך ויקיספר, אוסף ספרי הלימוד והמדריכים החופשי.

ידועה גם בשם : הספג מערבי (Western Bolt)

[עריכה] עקרונות השיטה

חסר

[עריכה] שלבי השיטה

מטרה : בדיקת נוכחת של חלבון לו קיים נוגדן.

השיטה :

1. בתוך תערובת מצויי אנטיגן (חלבון) אותו אנו רוצים למצוא.
2. הרצה בתוך חלבון ג'ל את מרכיבי התערובת.
3. הספגה = העברה לממבראנת (נייר) ניטרוצלולוז.
4. הוספת חלבון אינרטי (בדרך כלל חלב) לחסימת אתרים פנויים בממבראנה.
5. הוספת נוגדן ראשוני (1stAb) הנקשר לאנטיגן המבוקש.
6. הוספת נוגדן שניוני (2stAb) מסומן אנזימטית + סובסטרט (יוצר צבע), הנקשר אל הנוגדן הראשוני. בעקבות ההיקשרות נוצר תוצר בלתי מסיס. הנוגדנים השניונים מסומנים בר"א מבצעים אוטורדיוגרפיה.
7. פסי הצבע של התוצר מעיד על מיקום האנטיגן (במקרה שלנו ב-A ו-D).

[עריכה] יתרונות וחסרונות לעומת שיטת ELISA

חסר