ביוטכנולוגיה/שיטת ELISA – בוחן אימונואנזימי על מצע מוצק

מטרה : קביעת ריכוז ובדיקת נוכחות של נוגדן או אנטיגן בתמיסה.

אופן (עקרונות) :

• בדיקה עקיפה.
• מעכב אחר צבע התוצר המתקבל מפעילות האנזים הקשור לנוגדן/אנטיגן שיודע לזהות את אנטיגן/נוגדן המבוקשים - אל הנוגדן/אנטיגן קשור אנזים. הנגדן/אנטיגן נקשרים אל הנוגדנים/אנטיגנים המקובעים למצע.
• פחות מסוכנת מר"א.

הערה: בפעם הראשון עושים את הבדיקה עם נוגדנים/אנטיגנין מסומנים בריכוז ידוע כדי ליצור גרף.

Elisa – בדיקת ריכוז Ab בשיטה התחרותית (גרף יורד)

בדיקת ריכוז Ab בשיטה התחרותית

1. קישור אנטיגן למצע + חלבון אינרטי.
2. מוסיפים תערובת ובה ריכוז של Ab מסומן ודוגמא נבדקת.
3. הנוגדנים נקשרים לאנטיגנים המקובעים. בין הנוגדנים (מהדוגמא והמסומנים) יש תחרות על הקישור עם האנטיגן.
4. שטיפה.
5. הוספת סובסטרט (לבדיקת הפעילות האנזימטית) – האנזים קשור אל הנוגדנים/אנטיגנים המסומנים. הוא פועל על הסובטרט וכך נוצר צבע.

הערות :

• ככל שהגרף יותר גבוהה (כך יש יותר נוגדים הקשורים לאנטיגנים).
• זו היא הבדיקה המקובלת לקביעת ריכוז נוגדני אדמת בזמן הריון.

Elisa בדיקת ריכוז אנטיגנים בשיטה התחרותית (גרף יורד)

בדיקת ריכוז אנטיגנים בשיטה התחרותית

1. קישור אנטיגן למצע + חלבון אינרטי
2. הוספת אנטיגנים מהדוגמא הנבדקת (משולשים חופשיים) והוספת נוגדן אנזימי מסומן בר"א.
3. ישנה תחרות בין האנטיגנים החופשיים למקובעים + שטיפה.
4. הוספת סובסטרט (הוא היוצר צבע ונקשר לאנטיגן המסומן).

Elisa בדיקת ריכוז Ab בשיטה הלא תחרותית (גרף עולה)

בדיקת ריכוז Ab בשיטה הלא תחרותית

1. קישור אנטיגן למצע + חלבון אינרטי.
2. הוספת הדוגמא הנבדקת ($\ Y$) וקשירת לאנטיגנים.
3. הוספת נוגדן שניוני ($\ 2^{nd}Ab$) כנגד FC של נוגדן.
4. קישור $\ 2^{nd}Ab$ לנוגדן הקשור למצע + שטיפה.
5. הוספת סובסטרט הנקשר לנוגדן השניוני ויוצר צבע

Elisa בדיקת ריכוז אנטיגנים בשיטה הלא תחרותית (גרף עולה)

בדיקת ריכוז אנטיגנים בשיטה הלא תחרותית

ריכוז אנטיגנים בשיטה הלא תחרותית

1. קישור Ab לצלחת הבדיקה + חלבון אינרטי + שטיפה.
2. הוספת אנטיגנים מהדוגמא הנבדקת (מעוין) שאת ריכוזם ברצוננו לדעת (ככל שיותר אנטיגנים יקשרו, כך כמותם גדולה יותר) .
3. הוספת נוגדן מסומן כנגד האנטיגנים + שטיפה
4. בדיקת בליעה.

קישורים חיצונים

ערך בוויקיפדיה: ELISA

• נוגדנים ואימונודיאגנוסטיקה (שקופית 10)