ביוטכנולוגיה/מעבדה - מיקרוביולוגיה/שיטות לספירת חיידקיים

סוגי מצעים

1. מצע נוזלי – המים הופכים לעכורים עם גדילת כמות החיידקיים.
2. מצע מוצק – הוספת אגר למצע הנוזלי אשר בטמפרטורה גבוהה נוזל ובנמוכות מוצק. זורעים את החיידקיים ולאחר 12-24 שעות מופיעים מושבות. כל מושבה היא חיידק כיוון שמקורה הוא בחיידק אחד שהתרבה ומבחינה גנטית חיידקיו זהים.
3. מצע פשוט - בו אנו יודעים את מרכיבי המצע במדויק, כלומר אנו יודעים מהם המקורות המספקים את הפחמן (אם זה גליצרול, מולסה וכדומה), חנקן, ויטמנים ועוד.
4. מצע מורכב - בו הרכב אינו ידוע, אך הוא מספק את כל דרישות המערכת. כלומר, אנו שמים חומרים כמו למשל שמרים המכילים בתוכם סוגים של ויטמנים, סוכרים ועוד, המספקים את כל הכמות הדרושה לגדילה המיקרואורגניזם.

בדיקת פעילות מיקרואורגניזם

על מצעי גידול ניתן לבדוק אם חיידק מפרק חומרים מסוים, למשל אם אנו רוצים לדעת אם חיידק מפרק נפט ולהסתפק בו כמקור מזון יחיד , אנו נגדל אותו על מצע גידול עם נפט בלבד ואם יצמחו מושבות החיידק הכן יכול להתקיים רק מנפט.

שיטות לספירת חיידקים

קיים מגוון רחב של שיטות

מדידת עכירות

נעשה בכלי נוזלי ועל פי ככל שגדלה עכירות המים , כך גדלים כמות החיידקים. המכשיר שבודק את מדידת העכירות נקרא "ספקטרופוטומטר". הספקטרופוטומטר פולט קרן אור שנתקע בחיידק ולפי כמות האור היוצאת מהתמיסה נמדד כמות החיידקים או לפי כמות האור הנבלע בתמיסה.
חסרון השיטה הוא סף רגישות , כלומר המכשיר אינו מדויק מספיק וגם אור נבלע בתאים מתים ולכן כל שלב בגרף עקום הכיול נראה מאחור יותר ממה שהוא אומר להיות.

יתרונות : מהירה, קלה ונוחה.

חסרונות : לא מדוייקת.

ספירה חייה

שיטת עבודה :

1. לקיחת נפח קבוע של דוגמא מתרבית החיידקים
2. זרעית הדוגמא על מצע גידול מוצק
3. הנחת המצעים באינקובאטור למשך 24-12 שעות
4. ספירת מושבות

עקרונות מנחים :

1. כל מושבה מקורה בחיידק אחד ולכן ספירת מושבות כמוה כספירת חיידקים (מושבה = חיידקים).
2. המושבות צריכות להיות מבודדות זו מזו לשם ספירה נכונה.
3. מספר המושבות חייב להיות ספיר ובכדי להבטיח זאת נו מוהלים את התערבות וזורעים על מספר מצעים (במצע בו יש מספר ספיר של החיידקים סופרים)

יתרונות :מדוייקת.

חסרונות:קבלת תוצאה רק לאחר יממה.